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    實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗

    實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗

    簡(jiǎn)要描述:
    實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗(real-time PCR),屬于定量PCR(Q-PCR)的一種,以一定時(shí)間內DNA的增幅量為基礎進(jìn)行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相對定量??蓹z測mRNA,microRNA,lncRNA和DNA水平的基因拷貝數變化。

    更新時(shí)間:2023-10-30

    訪(fǎng)問(wèn)量:2137

    廠(chǎng)商性質(zhì):其他

    實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗具體方法

    1.SYBRGreen法:

    在PCR反應體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì )發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。

    SYBR定量PCR擴增熒光曲線(xiàn)圖

    PCR產(chǎn)物熔解曲線(xiàn)圖(單一峰圖表明PCR擴增產(chǎn)物的單一性)

    2.TaqMan探針?lè )ǎ?/p>

    探針完整時(shí),報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

    二、服務(wù)流程

    1、引物設計與合成
    2、DNA/RNA抽提
    3、反轉錄(針對RNA)
    4、上機定量分析
    三、客戶(hù)提供
    1、全血、組織或細胞。
    2、引物,或由豐核提供。
    3、基因信息:目的基因名稱(chēng)、物種和序列(或GenBank Accession Number)。
    四、交付內容
    實(shí)驗報告:詳細操作步驟
    原始數據:溶解曲線(xiàn)圖,擴增曲線(xiàn)圖,ct值

    實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗服務(wù)列表

    項目

    備注

    周期

    引物設計與合成

     

    3個(gè)工作日

    提取

    RNA提取、miRNA提取、DNA提取

    2個(gè)工作日

    反轉錄

     

    2個(gè)工作日

    qPCR反應

    SYBR Green方法,相對定量

    2個(gè)工作日

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