細胞流式檢測

細胞流式檢測流式細胞術(shù)（FlowCytometry，FCM）：

就是對在高速流動(dòng)的鞘液包裹下的細胞、粒子進(jìn)行分析和分選的技術(shù)，這種細胞或粒子是經(jīng)過(guò)特異熒光標記的。其特點(diǎn)是測量速度快，每秒鐘能測數千個(gè)乃至上萬(wàn)個(gè)細胞，且可進(jìn)行多參數測量，另一特點(diǎn)是在分析的同時(shí)可把具有特征的細胞分離出來(lái)，這就是分選技術(shù)。

 重要參數：前向角散射（FSC）：前向角散射光的強度與細胞的大小有關(guān)，也就是說(shuō)，同一個(gè)細胞群體，FSC強的，其細胞大一些，而FSC弱的，其細胞小一些。側向角散射（SSC）：側向角散射又稱(chēng)90°散射或大角散射。側向角散射光對細胞膜、胞質(zhì)、核膜的折射率更為敏感，對胞內較大的顆粒也會(huì )有反應。所以，側向角散射光的強弱可反應細胞內精細結構和顆粒的性質(zhì)。熒光信號（FL）：是細胞或細胞上的熒光染料被激光激發(fā)后發(fā)射出的熒光，不同的熒光染料其發(fā)射波長(cháng)不同。通過(guò)熒光強度可將同一個(gè)細胞群體中的有熒光標記的細胞與無(wú)熒光標記的細胞區分開(kāi)來(lái)，也就是我們通常所說(shuō)的陽(yáng)性細胞，也可以將陽(yáng)性細胞中的高FL的細胞與低FL的細胞區分開(kāi)來(lái)，也就是可以把強陽(yáng)性細胞和弱陽(yáng)性細胞區分開(kāi)來(lái)。一般的流式細胞儀只裝有一個(gè)激光光源（488nm），可測出三個(gè)FL，即FL1、FL2、FL3。FL2-W指檢測熒光的脈沖寬度，區分單個(gè)細胞和雙聯(lián)體細胞FL2-H指脈沖高度，細胞單位面積上的熒光濃度FL2-A指脈沖面積，即細胞熒光總和。

細胞流式檢測周期檢測：

    細胞內的DNA含量隨著(zhù)細胞周期進(jìn)程發(fā)生周期性變化。利用PI標記的方法，通過(guò)流式細胞儀對細胞內DNA的相對含量進(jìn)行測定，可分析細胞周期各時(shí)相的百分比，反映細胞的增殖狀態(tài)和非二倍體（異倍體）的DNA含量。其中PI可以與細胞內DNA和RNA結合，采用RNA抑制劑將RNA消化后，通過(guò)流式細胞術(shù)檢測與DNA結合的PI的熒光強度直接反映了細胞內DNA含量的多少。

細胞增殖檢測

    示蹤染料標記法：示蹤染料能與細胞發(fā)生非特異性的穩定結合，主要有兩種結合方式：進(jìn)入胞內與蛋白質(zhì)共價(jià)結合，如CFSE和BRSE；嵌入細胞膜的磷脂雙分子層，與細胞非公價(jià)結合，如PKH類(lèi)和CellVue類(lèi)等。CFSE是活細胞染料，又稱(chēng) CFDA-SE或 CFDA，其標記細胞后對細胞毒性小，被激發(fā)后能發(fā)出很強熒光，且非常穩定，只有當細胞分裂時(shí)，母細胞內的染料會(huì )被平均分配到子細胞中，細胞的熒光信號減少一半，細胞分裂代數越多，信號降低程度越大。

細胞因子檢測

    細胞因子是一類(lèi)能在細胞間傳遞信息、具有免疫調節和效應等功能的蛋白或小分子多肽。根據功能可分為六大類(lèi)：白細胞介素、干擾素、集落刺激因子、腫瘤壞死因子、生長(cháng)因子和趨化因子。胞內細胞因子：胞內染色法（ intracellularstaining assay）；胞間細胞因子：CBA法（cytometric bead assay，流式微球陣列）。其優(yōu)點(diǎn)為單細胞水平，可多參數檢測。